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Protocolo simplificado de Obtenção de P.R.P.
Biologia das Plaquetas
Prof. Dr. Renato Rossi Jr.
História
A identificação das
plaquetas como uma classe de corpúsculos do sangue foi descrita por Bizzozzero
(1882), a importância de plaquetas para a formação do coágulo e do início
da hemostasia foi informada primeiro por Eberth e Schimmelbusch (1888). Outro
marco importante na pesquisa das
plaquetas foi colocado por Aschoff (1925), que expressou a opinião de que
existem duas chaves para a
compreensão de trombogenesis:
1) Agregação das
plaquetas como acontece em um
trombo, só ocorre contanto que o sangue esteja fluindo.
2)Formação de fibrina não
é um evento primário em trombose, mas é precedido por mudanças importantes
dos elementos corpusculares do
sangue.
Descrição
Plaquetas são os
componentes corpusculares menores
do sangue humano (diâmetro 2-4µm) - o número fisiológico varia de 150.000 a
300.000/mm³ sangue.
A origem de plaquetas é a
medula óssea onde megacariócitos - como os resultados de proliferação de uma
célula progenitora - liberam plaquetas como o produto final de protrusões de
suas membranas e citoplasma. A
forma típica das plaquetas é discóide, em ativação eles sofrem uma mudança
de forma a uma forma globular com projeções e pseudópodes.
Membrana e Receptores
A cobertura das
plaquetas consiste em uma membrana dupla fosfolipídica típica. Embutido nesta
estrutura de líquido é tipos diferentes de glicoproteinas (GP) - os receptores
para ativação e interação com outras celas.
GPIb/IX medeia adesão das
plaquetas para colágeno e camada subendothelial
(COL) parar fator de
vonWillebrand (vWf)
GPIa medeia adesão de
plaquetas por ligar a COL.
GPIIb/IIIa serve como o
local que liga moléculas adesivas
que possuem um Arg-Gly-Asp-X =RGDX peptide como
por exemplo fibrinogênio,
GPIIb/IIIa mediam
a interação entre plaquetas ou entre plaquetas e células
tumorais.
Citoesqueleto das
Plaquetas e Sistema Microtubular (MTS)
Actina (10-20%) e miosina
(15-20%) como as proteínas principais formam uma cadeia tridimensional pelo
citoplasma das plaquetas. Uma segunda cadeia bidimensional de fibras de actina
menores como um esqueleto da membrana, responsável pela forma discóide da
plaqueta ativada. Além disso, um pacote marginal de microtubulos (MTS) apóia o
esqueleto da membrana de actina mantendo esta forma de discóide.
Sistemas de membrana
Perto do MTS, um sistema de
membrana, é localizado um sistema tubular denso nomeado , (DTS). O DTS serve
como uma piscina para o cálcio no interior da plaqueta e é o compartimento
principal de acumulação e síntese
de tromboxano pois é o local onde
o ciclooxigenase (COX) é
localizada. A proximidade para o MTS sugere sua origem como um reticulo
endoplasmatico liso, analógico ao reticulo sarcoplasmatico em tecido muscular.
Cercando a zona da organella existe um
sistema de membrana com invaginações da membrana da plaqueta. Considerando que
este sistema é conectado à superfície da plaqueta, é chamado o sistema
canalicular aberto (OCS) e oferece capacidade adicional
para a membrana durante ativação, quando a relação de superfície-para-volume
aumenta.
Organelas
As organelas são distribuídas
uniformemente no citoplasma das plaquetas. Mitocondrias servem como fonte de
energia, desde que as plaquetas cubram a despesa de energia através de
fosforilação oxidativa, semelhante a outras celulas. A maioria das organelas
é sem dúvida composta por grânulos
de armazenamento (~40/plaqueta). Alfa-grânulos contêm fibrinogenio,
trombospondina, F V, fator von Willebrand, beta-tromboglobulina (ß-TG), fatores
plaquetários 4 (PF4), etc. Corpos densos contêm cálcio, serotonina,
nucleotides de adenina, etc. As plaquetas ativadas
lançam o seu conteúdo
e contribuem com as interações diversas com outras plaquetas ou outras
celulas.
Componentes fisiológicos das
Plaquetas
§ PDGF (Fator de
crescimento derivado das Plaquetas)
§ TGF-a
& b (Fator de crescimento transformador alfa e beta)
§ EGF (Fator de
crescimento epitelial)
§ FGF (fator de
crescimento de fibroblastos)
§ IGF (fator de
crescimento semelhante a Insulina)
§ PDEGF (fator de
crescimento de epitelial derivado de plaquetas)
§ PDAF (Fator Angiogênico
derivado de plaquetas)
§ Atração e concentração
alta de leucócitos (neutrófilos, eosinófilos)
§ Atração e concentração
alta de macrófagos e outras celulas de fagocitose, para o debridamento biológico.
§ Histamina, Serotonina,
ADP, Thromboxano A2, e outros agentes vasoativos de quimiotaxia.
§ Concentração de
plaqueta alta e concentração de fibrinogênio nativa para hemostase.
Fatores de crescimento que
participam da Reparação Tecidual
1 - Fator de Crescimento
Epitelial
53-amino cadeia ácida de
polipeptidio liberado durante degranulation de plaqueta
Estimula a
reepitelização, angiogenesis, e atividade da colagenase
2. Fibroblast Crescimento
Fator
Estimula angiogenesis
Estimula proliferação das
celulas endoteliais
Estimula síntese de colágeno
Estimula contração da
ferida
Estimula síntese de matriz
Estimula epitelização
Produz fator de
crescimento dos queratinocitos
3. Fator de Crescimento
derivado de Plaqueta
Produzido pelos grânulos
alfa da plaqueta
Activa TGF-b
Estimula neutrófilos e macrófagos
Estimula quimiotaxia
Estimula mitogenesis de fibroblastos e células de músculo
liso
Estimula síntese de colágeno e atividade de colagenase
Estimula angiogenesis
4. Fator de Crescimento
transformador - Beta
Encontrado nos grânulos de alfa da plaqueta
Estimula monócitos para
secretar FGF, PDGF, Fator de Necrose de Tumor - Alfa (TNF-a),
e Interleucina-1
Estimula quimiotaxia de fibroblastos e proliferação
Estimulator Potente de síntese de colágeno
5. Fator de Crescimento
transformador - Alfa
Variante do
Fator de Crescimento
Epitelial
Produzido por plaquetas ativadas, macrofagos, e queratinocitos
Estimula células mesenquimais, epiteliais, e crescimento de células
endoteliais
6. Interleucina - 1
Estimula proliferação de limfócitos
Influencia a atividade
da colagenase
Reparação Tecidual
Tipos de reparação tecidual:
Reparação por primeira
intensão ou Primária - Acontece quando uma ferida já está fechada dentro de
alguns horas após sua criação. Extremidades da ferida são cirurgicamente
ou mecanicamente aproximadas, e o metabolismo do colágeno provê força
a longo prazo.
Reparação por segunda
intensão ou Secundária - Acontece quando uma ferida mal delineada
permanece aberta e perca a proteção contra a
infecção da ferida. Isto exige uma maior formação de colágeno e uma
maior dificuldade da epitelização.
Fases De Cura de Ferida:
Coagulação
As plaquetas são as
responsáveis pela hemostasia essencial.
Os grânulos alfa das
plaquetas produzem fatores de crescimento (PDGF,
TGF-b, Plaqueta fator IV), que iniciam a cascata
curativa da ferida atraindo e
ativando fibroblastos, células endoteliais,
e macrófagos.
Corpos densos das plaquetas
armazenam aminas vasoativas (serotonina)
as quais aumentam a permeabilidade vascular.
A Fibrina que deriva de
fator (Fibrinogênio), é essencial
para a cura porque provê a matriz
na qual celas podem migrar.
Inflamação
Aguda
Complementa a
ativação
Infiltração da ferida por
granulócitos (24-48 horas do dano). Isto acontece por quimiotaxia pelo lançamento
de mensageiros químicos de plaquetas. A função principal de granulócitos é
remover bactérias e células mortas da ferida.
Inflamação Crônica
Aparecimento de monócitos
- macrófagos na ferida (48-72 horas de dano). Esta célula é um fagócito e é
o produtor primário de fatores de crescimento
responsáveis pela proliferação de matriz de extracelular, músculo liso, e
celas de endoteliais que resultam em angiogenesis. Estas células aparecem por
quimiotaxia através da atração de fatores
como complementos, IgG , colágeno, citocinas, fatores IV de plaquetas, e
fatores de crescimento de plaquetas
(PDGF & TGF-b).
Aparecimento de
linfócitos.
Migração
de Fibroblastos e Síntese de colágeno
Estimulação através de
fatores de crescimento.
Migração de células
mesenquimais na ferida.
Síntese de
Colágeno . Colágeno provê força e integridade para todos os tecidos.
§ Colágeno Tipo I -
componente estrutural de ossos, tecido mole , e tendões
§ Colágeno Tipo II -
componente estrutural da cartilagem
§ Colágeno Tipo III -
em associação com Tipo I
§ Colágeno Tipo IV -
componente estrutural de membrana
§ Colágeno Tipo V - na córnea.
Angiogenese
Formação de vasos sanguíneos
novos. Este processo é iniciado por TGF-b e outro fator de crescimento
e é contínuo ao longo das fases
curativas.
Epitelização
Formação de
epitélio diferenciado que provê uma barreira entre ambientes internos e
externos.
Remodelação
Síntese de colágeno contínua
e desarranjada. Remodelando a
matriz fibroblastos, granulocitos, e macrofagos produzem metaloproteinases
que são necessárias para a
degradação do colágeno.
Inibidores de Metaloproteinases são produzidos por TGF-b que termina por estabilizar a cicatriz.
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